發(fā)表學(xué)術(shù)論文的格式要求(2)
發(fā)表學(xué)術(shù)論文的格式要求
副標(biāo)題#細(xì)菌的學(xué)術(shù)論文范文
L型細(xì)菌及其感染
【關(guān)鍵詞】 L型細(xì)菌
L型細(xì)菌(L菌)早就發(fā)現(xiàn)了，只是直到近20多年來由于檢驗(yàn)技術(shù)不斷地改善，才對L菌及其感染有了較為深入的認(rèn)識，有關(guān)的報(bào)道才越來越多，其所致的病種范圍也在不斷地?cái)U(kuò)大。據(jù)國內(nèi)擬診敗血癥的萬余例一般培養(yǎng)的結(jié)果，有細(xì)菌生長者僅占17.8%～18.4%，即使診斷為菌血癥者，細(xì)菌培養(yǎng)陽性者也僅占42%，膿汁培養(yǎng)陰性者達(dá)到27.3%，普通培養(yǎng)陰性者除疑厭氧菌外，就疑L菌;另有材料云，敗血癥常規(guī)血培養(yǎng)陽性率為13.2%，L菌的檢出率為36.3%，甚有高至60%～80%;急性風(fēng)濕熱患者有83%從血中培養(yǎng)到L型鏈球菌;尿道感染尿常規(guī)培養(yǎng)細(xì)菌檢出率為9.9%,L菌占33.9%，后者中大腸桿菌L菌占23.1%，金葡菌L菌占21.4%。于今對L菌的認(rèn)識已不僅是細(xì)菌形態(tài)學(xué)問題，而是涉及到傳染病學(xué)、遺傳學(xué)、病理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)及生物制品質(zhì)控等廣泛領(lǐng)域的重要問題[1]。因而作者據(jù)手頭資料就此題目作一扼要介紹于下。
1 L菌名稱的由來
1935年英國學(xué)者Klieneberger在研究鼠咬熱的病原體念珠狀鏈桿菌時(shí)，意外地發(fā)現(xiàn)了一種肉眼可見的微小菌落，其菌體呈高度多型性，認(rèn)為是該菌的一個(gè)變種;因?yàn)樵撟兎N是在Lister醫(yī)學(xué)研究所內(nèi)發(fā)現(xiàn)的，即取其第一個(gè)字母以命名，故稱為L菌。Lister是英國著名的微生物學(xué)家。L菌也稱細(xì)菌L型，其可見的英文名稱就有5個(gè)之多，即L-form、L-phase、L-organism、L-phase variant和Cell wall deficient bacteria，以前者為常見。
2 L菌的分布
此型細(xì)菌分布極廣，可以說凡有細(xì)菌存在之處，如土壤、河水、動物器官及人體組織等，便有L菌的存在;病原微生物的L菌保存著一定的毒力，具有致病性。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些真菌和螺旋體也會變成L菌。
3 L菌的形成
凡能直接或間接地作用于菌壁，使其產(chǎn)生亞致死性損害的各種因素，均可誘生出L菌。其機(jī)制有以下兩種：
3.1 自發(fā)形成
很少見，機(jī)制不明;目前所知只有念珠狀鏈桿菌和擬桿菌可自然形成。
3.2 誘導(dǎo)產(chǎn)生
抗生素如青霉素類、頭孢菌素類、萬古霉素、桿菌肽和溶葡萄球菌素等，在長期給藥后;酶的作用如溶菌酶和脂酶等;免疫作用如抗體、補(bǔ)體噬菌體和吞噬細(xì)胞等;氨基酸如甘氨酸、蛋氨酸和甲硫氨酸等;理化因素如亞硝酸鹽、D-環(huán)絲氨酸、紫外線、去氧膽酸鹽等，均可誘生此型細(xì)菌。這些因素導(dǎo)致產(chǎn)生L菌的機(jī)制有4種：改變細(xì)菌的DNA;破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁;阻斷細(xì)菌的肽聚糖的合成和機(jī)體的免疫干擾[2]。
G+球菌以金葡菌為代表說明之。金葡菌的細(xì)胞壁的主要成分為黏肽，占胞壁干重的50%～80%。β-內(nèi)酰胺類抗生素和溶菌酶均可干擾其合成，使菌壁出現(xiàn)缺陷;溶菌酶還能破壞乙酰葡糖胺和乙酰胞壁酸分子間的連接;半合成青霉素的脂溶性強(qiáng);這些均會破壞菌壁。G-桿菌的細(xì)胞壁的主要成分是脂多糖，黏肽含量少，只占菌壁干重的1%～10%，故不受β-內(nèi)酰胺抗生素的影響，但可被脂酶所損害，進(jìn)而菌壁便遭破壞。
4 L菌的形態(tài)與生物學(xué)特性
4.1 形態(tài)學(xué)特性
(1)細(xì)胞壁缺損：此型細(xì)菌雖然胞壁缺如或殘缺不全，但是只要其胞漿完整無損，在高滲環(huán)境中依然具有生命力，可生長繁殖;(2)基本形態(tài)：高度多形性，可表現(xiàn)為球狀、桿狀、鏈狀及絲狀形，且大小不一;菌落微小，直徑只1μm左右;在瓊脂培養(yǎng)基上，進(jìn)而細(xì)胞壁便遭破壞菌落內(nèi)陷，與普通的菌落外凸不同;在低倍顯微鏡下，菌落呈“油煎蛋”樣;在高倍鏡下，菌落邊緣為大形菌，比親本菌株要大，中心為小形菌。
4.2 生物學(xué)特性
(1)嗜高滲性：只有在高滲環(huán)境中才能生長，在普通的培養(yǎng)基上不生長;由于已經(jīng)失去了堅(jiān)固的菌壁，只剩下一層胞漿膜，故在非高滲的環(huán)境中，菌體就會迅速地溶解而死亡;如L型金葡菌在蒸餾水中3min就會裂解，2h后消失，在0.1%～0.2%的氯化鈉溶液中，15min后，細(xì)菌減少90%，而在2%～15%的氯化鈉溶液中，菌體則無變化; (2)返祖性：這是一個(gè)重要的生物學(xué)特性;當(dāng)抑制、破壞菌壁的因素去除后，L菌又恢復(fù)了完整的細(xì)胞壁，變回親本菌株，又有了親本菌株的特性，這就是返祖性。返祖性又可分為下列兩種，即①易變性L菌：當(dāng)抑制、破壞細(xì)胞壁的因素去除后很快回復(fù)到親本菌株的L菌稱之;臨床分離到的多為此型;通常剛形成的或細(xì)胞壁缺陷較輕的L菌較易返祖，細(xì)胞壁完全缺如者則不易返祖;②穩(wěn)定性L菌：當(dāng)抑制、破壞細(xì)胞壁的因素去除后，經(jīng)過多次傳代仍然保持著L菌的特性稱之;嚴(yán)格地說，只有這一型的細(xì)菌才能稱為L菌;(3)弱抗原性：細(xì)菌的主要抗原在胞壁及其表面的附屬物上，一旦菌壁缺失，就會導(dǎo)致抗原性大為減弱，乃至消失;L菌可長存于宿主的體內(nèi)，并抗拒宿主的防衛(wèi)機(jī)制;它雖具抗原性，但抗原性薄弱，因此能逃避宿主免疫系統(tǒng)的自衛(wèi)性攻擊;這就是L菌得以長存于宿主體內(nèi)的原因。
5 L菌的培養(yǎng)
它可分為3種類型，即液體增菌培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在普通培養(yǎng)基中可加入滲透壓穩(wěn)定劑20%的人血漿(或馬血漿)和5%氯化鈉，也有用10%馬血漿和3%～5%氯化鈉(或12%～15%蔗糖);固體培養(yǎng)基現(xiàn)多用成品Kagan培養(yǎng)基;國內(nèi)多用改良培養(yǎng)基。要用特殊的高滲培養(yǎng)劑是因?yàn)長菌的胞膜內(nèi)蛋白質(zhì)含量高，導(dǎo)致滲透壓高于胞膜外，培養(yǎng)時(shí)需要有一定的高滲環(huán)境才能穩(wěn)住菌形不變。這也就是L菌常規(guī)培養(yǎng)陽性率不高的原因?，F(xiàn)在知道L菌也存在于紅細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)紅細(xì)胞裂解時(shí)此菌就大量釋入于血中，故有學(xué)者就把采得的血標(biāo)本用溶血法把紅細(xì)胞溶解來培養(yǎng)L菌，結(jié)果常規(guī)培養(yǎng)檢出率為1.4%(3/210份)，溶血培養(yǎng)檢出率為48.5%(102/210份)，檢出率明顯提高[3]。
6 L菌與支原體的實(shí)驗(yàn)室區(qū)別
兩者極易混淆，必須認(rèn)真鑒別，其鑒別點(diǎn)如下： L菌的形成是外界因素影響所致，而支原體則是固有形態(tài)，在分類學(xué)上毫無關(guān)系;L菌的菌落較大，為0.5～1.0mm,支原體的菌落則較小，為0.1～0.3mm;L菌有返祖性，支原體則無此特性;保色時(shí)間有別，L菌因?yàn)榫谌毕?，致結(jié)晶紫易滲入，和支原體一樣均可被染成藍(lán)色，但前者的保色時(shí)間較長，后者則相反，很快褪色;兩者無共同的抗原性，不發(fā)生交叉反應(yīng);L菌在增殖期不需要膽固醇，而支原體則需要此種物質(zhì)。
7 L菌的致病性[2，4～8]
此型細(xì)菌可引起人類各部位的感染，并反復(fù)發(fā)作致疾病慢性化。但L菌只有與人體細(xì)胞發(fā)生粘著才能致病，盡管它的粘著力弱，只有親本菌株的1/10，但粘著的時(shí)間卻很長。通常親本菌株由于菌壁含有多糖類物質(zhì)，可起趨化作用，故感染后外周白細(xì)胞會增多，而L菌因無菌壁，也即無多糖類物質(zhì)存在，故感染后外周白細(xì)胞仍在正常范圍內(nèi)，常致誤診，值得注意;但中性粒細(xì)胞內(nèi)可見中毒性顆粒，骨髓可呈感染象。此型細(xì)菌廣泛存在。凡長期發(fā)熱，普通培養(yǎng)無菌生長，以致診斷不明者，必須想到兩個(gè)可能性：一是L菌的感染;另一是厭氧菌的感染。對此均必須做這兩項(xiàng)培養(yǎng)，以免誤診或漏診。據(jù)報(bào)道，曾用過抗生素的出血原因不明的慢性尿道炎患者作尿L菌培養(yǎng)，檢出率竟高達(dá)96%。至目前已從敗血癥、流腦、傷寒、布氏菌病、肺炎、關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、子宮內(nèi)膜炎、宮頸糜爛、心內(nèi)膜炎和肺結(jié)核等患者的相關(guān)標(biāo)本中分離到了L菌，且多呈慢性過程。結(jié)核菌在宿主免疫力增強(qiáng)和藥物作用下可被消滅或轉(zhuǎn)變?yōu)長菌，致使臨床癥狀緩解;找不到致病菌的復(fù)發(fā)型結(jié)核病，有可能是L菌所致;有學(xué)者認(rèn)為如果分離到結(jié)核菌的L型，便可擬診為結(jié)核病，且處于活動期。腦膜炎雙球菌的L型及其返祖的親本菌株，均可引起非典型性化膿性腦膜炎。在抗生素用于臨床前的年代里，在風(fēng)濕性患者的血液中常分離到溶血性鏈球菌，但當(dāng)今則否，在部分此種患者的血液中分離到的則是此菌的L型。很多的尿道炎患者，尿標(biāo)本普通培養(yǎng)陰性，在改用高滲透壓培養(yǎng)基后，即培養(yǎng)到了L型致病菌，現(xiàn)在用溶血法培養(yǎng)檢出率大為提高;L菌培養(yǎng)陽性多見于病程的緩解期;在一定條件下，L菌株會返祖為親本菌株，于是不斷復(fù)發(fā)，繼而轉(zhuǎn)為慢性尿道炎。有學(xué)者認(rèn)為布氏桿菌病其所以反復(fù)發(fā)作呈慢性過程，很可能就是L菌株在作怪。慢性宮頸炎中，L菌最高占80.0%～82.4%，是宮頸炎持久不愈的重要原因;子宮內(nèi)膜炎也可為L菌所致，并引起不育癥;其基底層血管豐富，有利于L菌長期生存、繁殖，致內(nèi)膜長期不規(guī)則地出血。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)功能性子宮出血者也屢見L菌感染;因?yàn)樽訉m出血易并發(fā)感染，故多用抗生素預(yù)防性給藥，這就導(dǎo)致了L菌的產(chǎn)生;一旦宿主免疫力低下 ，L菌便返祖成為親本菌株，毒力大增，以致反復(fù)出現(xiàn)臨床癥狀;子宮內(nèi)膜炎表層可因脫落、刮宮后而清除或致炎癥減輕，但基底層感染卻難以消失，其所感染的親本菌株常于抗生素或宿主因素誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)變?yōu)長菌，并感染于間質(zhì)層。L菌也是醫(yī)院內(nèi)感染的重要致病菌之一;據(jù)一組報(bào)道從1870例住院患者的血、尿、胸水、膽汁和腦脊液做細(xì)菌常規(guī)培養(yǎng)，均陰性，而做L菌培養(yǎng)卻分離到427株L菌，檢出率為22.8%，菌種達(dá)11種之多，說明L菌醫(yī)院內(nèi)感染的嚴(yán)重性。L菌的毒力要比親本菌株低，故常無急性過程，菌株長期保存于宿主體內(nèi)，使患者成為持久的傳染源。
L菌感染的診斷必須依據(jù)細(xì)菌學(xué)，因其生長緩慢，故細(xì)菌學(xué)診斷較為困難，培養(yǎng)前必須為其選擇好適宜的培養(yǎng)基，創(chuàng)造好良好的條件。
8 L菌感染的抗菌藥物[2，8～10]的選擇
8.1 適當(dāng)選抗菌藥物
親本菌株變成L菌株后，其藥敏性也隨之發(fā)生很大的變化，因此要針對L菌的特點(diǎn)來選用抗菌藥物。因?yàn)榫谌比缁驓埲辈蝗?，故不能采取作用于?xì)菌壁的藥物，如青霉素類和頭孢菌素類等，但后者臨床應(yīng)用卻常有效，原因可能是菌壁并非均缺損，或此種抗生素也作用于細(xì)胞質(zhì)之故。這些抗生素只能破壞其親本菌株，而對已失去菌壁、變成L菌株者無效，且會繼續(xù)誘生出L菌株來，致使病情遷延不愈;對此可選取對菌壁及胞漿膜均有效的抗生素，如萬古霉素、綠霉素和新生霉素等;可選取作用于胞漿膜和干擾蛋白質(zhì)合成的抗生素，如阿米卡星、慶大霉素、妥布霉素和小諾霉素等氨基糖甙類抗菌藥物，它們對L菌株的殺滅作用要比對親本菌株更強(qiáng)，特別是前者對大多數(shù)氨基糖甙鈍化酶穩(wěn)定，盡管臨床使用頻率高，也不易產(chǎn)生耐藥;也可選用大環(huán)內(nèi)酯類和四環(huán)素類，分別如紅霉素、羅紅霉素、螺旋霉素，和多西霉素、美滿霉素等，這些抗生素均可抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的形成;喹諾酮類，如氧氟沙星、左氧氟沙星等均是抑制致病菌的核酸的核成，從而發(fā)揮殺菌效應(yīng)的;不宜選擇作用于胞漿膜上的磷脂的抗菌藥物，如多黏菌素B等，因G+細(xì)菌的菌壁及胞漿膜均缺乏磷脂，故這些抗生素對L菌株及其親本菌株是無效的。
8.2 藥敏的變遷
L菌的藥敏常有別于親本菌株，它可產(chǎn)生抗藥性，原來用的抗菌藥物的種類及劑量會失效能，必須更換藥物，加大劑量，才能有效;β-內(nèi)酰胺類誘導(dǎo)的L菌，其致病性及其毒力均較為薄弱，以致癥狀較為緩和/或有所緩解，但停藥后，L菌又返祖為親本菌株，毒力增加，癥狀又顯化起來，此即所謂“反跳”;故治療必須長期，尤其是對于敗血癥。親本細(xì)菌耐藥的菌株轉(zhuǎn)變?yōu)長菌株后，細(xì)胞壁上的耐藥R質(zhì)粒通常會因菌壁缺損而丟失，返祖后耐藥性不能恢復(fù);但R質(zhì)粒丟失與否要看菌壁損失的程度，當(dāng)編碼耐藥的DNA還結(jié)合存在時(shí)，耐藥性就會繼續(xù)存在。
8.3 聯(lián)合用藥
通常在應(yīng)用抗生素時(shí)，要采用兼顧療法，既對L菌，又對其親本菌株用藥。這是因?yàn)榭股刈饔糜谟H本菌株可誘導(dǎo)其變?yōu)闊o菌壁的L菌株，但同期中L菌株也可返祖為有菌壁的親本菌株，或兩型菌株同時(shí)存在。
【參考文獻(xiàn)】
1 楊衛(wèi)平，李家泰. L型細(xì)菌感染. 見：斯崇文，賈輔忠，李家泰主編. 感染病學(xué). 北京：人民衛(wèi)生出版社，2004，670～676.
2 田碧文. 細(xì)菌L型與醫(yī)院感染. 中華醫(yī)院感染病學(xué)雜志，1999，9(2):126～128.
3 Domingue GI, Thomas R, Walters F， et al. Cell wall deficient becteria as a cause of idiopathic hematuria. J Urtol， 1993， 150(2) :483～485.
4 李艷，蔣漢茂. 溶血法培養(yǎng)在細(xì)菌L型檢驗(yàn)中的應(yīng)用. 中華醫(yī)學(xué)研究雜志，2006，6(3):277～278.
5 楊曉菊，岳亞飛，徐琳，等. 宮頸糜爛與L型細(xì)菌感染的關(guān)系探索. 陜西醫(yī)學(xué)雜志，2004，33(5): 433～435.
6 嚴(yán)知明，杜毅新，鄭 篪. 宮頸糜爛患者宮頸分泌物中L細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果分析. 中國誤診學(xué)雜志， 2007，7(13):3003～3004.
7 李勤，賀丁山，劉建純，等. 一起L型傷寒流行的實(shí)驗(yàn)研究. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2004，14(4):449～450.
8 樊秀華，彭少華. 427株細(xì)菌L型醫(yī)院感染與耐藥分析. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2000，10(1):13～14.
9 張秋桂，高思健. 10200例尿液標(biāo)本細(xì)菌L型培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析. 南華大學(xué)學(xué)報(bào)， 2001，29(2):133～135.
10 可秋萍. 敗血癥抗菌藥物使用對L細(xì)菌耐藥變遷的影響. 中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志， 2005，8(4):368～369.
看了“發(fā)表學(xué)術(shù)論文的格式要求”的人還看：