酶標(biāo)儀的用法
酶標(biāo)儀，即酶聯(lián)免疫檢測儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器。實(shí)際上就是一臺變相的專用光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同。下面學(xué)習(xí)啦小編就給大家介紹酶標(biāo)儀的用法。
酶標(biāo)儀的簡介
酶標(biāo)儀，即酶聯(lián)免疫檢測儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器。實(shí)際上就是一臺變相的專用光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同?？珊唵蔚胤譃榘胱詣雍腿詣?大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計,即用比色法來分析抗原或抗體的含量。 ELISA測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下，用一般光電比色計無法完成測試，因此對酶標(biāo)儀中的光電比色計有特殊要求。
酶標(biāo)儀9602是由北京普朗研發(fā)生產(chǎn)，儀器測量準(zhǔn)確，重復(fù)性好，能做定性和定量兩種檢測，具有質(zhì)控功能;強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，無需外接計算機(jī)即可做126個項目，自動完成準(zhǔn)確的定量分析。
酶標(biāo)儀的使用方法
開機(jī)
1將酶標(biāo)儀后部的電源開關(guān)燈打開，儀器將顯示自檢、基礎(chǔ)酶聯(lián)、軟件版本號，隨后顯示基礎(chǔ)酶聯(lián)、準(zhǔn)備和時間。在自檢過程中，儀器對每一個已裝的濾光片選擇合適的光強(qiáng)度，開機(jī)后，等候1分鐘預(yù)熱。
2開機(jī)后，測量模式1及其某些參數(shù)(如：單波長檢測、1號濾光片、不作數(shù)據(jù)計算，進(jìn)板方式、無板統(tǒng)計分析和打印機(jī)方式)都已默認(rèn)。
裝紙
1按下paperfeed健，取下運(yùn)輸中裝入打印機(jī)系統(tǒng)的紙張，將卷紙游離端插入儀器后部的插口，直至有輕微阻力感。注意卷紙轉(zhuǎn)動的正確方向。
2按下paperfeed健，直至將紙送入打印機(jī)。將卷軸插入卷紙，將卷軸及卷紙放入儀器后部的凹槽。
檢測
選擇程序模式時，先按shirt鍵，再按enter鍵。程序模式有：基礎(chǔ)酶聯(lián)軟件、凝集檢測軟件、臨界值定性軟件、曲線回歸定量軟件。在確定程序模式后，進(jìn)入自檢并完成。在每個程序模式里選擇所需的測量模式和參數(shù)、計算模式和參數(shù)。按star健開始檢測。檢測后，結(jié)果會輸出至內(nèi)置打印機(jī)或通過接口輸出。
酶標(biāo)儀的原理
酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺變相的專用光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同.圖示是一種單通道自動進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號.電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計算，最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果.微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動來移動微孔板，從而實(shí)現(xiàn)自動進(jìn)樣檢測過程.而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動微孔板進(jìn)行檢測，因此省去了X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡單.
微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液.
光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍(lán)紫光，但對綠色不吸收，反射出來，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。
檢測單位
光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測單位用OD值表示，OD是opticaldensity(光密度)的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度，OD=1og(1/trans)，其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度，Ι0為在檢測物之前的光強(qiáng)度，Ι為從被檢測物出來的光強(qiáng)度。
OD值由下述公式計算：
E=OD=C×D×E
C為檢測物的濃度D為檢測物的厚度E為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長，在此波長下，此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測，稱為測量波
長。
但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準(zhǔn)確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
檢測值計算
儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號，最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為0%，沒有檢測物的透光值為100%。則實(shí)際檢測中，檢測物的透光值均在0%一100%之間。透光值
的計算如下：
T=(Meas—Min)/(Max—Min)
其中T為透光值，Meas為檢測的二進(jìn)位數(shù)值，Min為在0%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值，Max為在100%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：
MaX=3600Mn=20Meas=30
T=(30-20)/3600-20)=0.0028
OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552
中心定位
儀器會自動對酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準(zhǔn)確。在對每一個酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測時，儀器其實(shí)要進(jìn)行35個點(diǎn)的測量，選取最中間的5個點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。
用途和其它提示
用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實(shí)驗室，包括臨床實(shí)驗室。
質(zhì)量控制
質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
空白校正
有一些試劑盒的說明書將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的，請按照試劑盒的說明書要求進(jìn)行。
檢測結(jié)果的解釋
由于有相當(dāng)多的因素會影響檢測的結(jié)果，如不同的酶標(biāo)板，檢測試劑的體積，都會造成OD值的不同，因此，只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對結(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進(jìn)行.
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