高中生物植物體細胞雜交技術知識點
高中生物植物體細胞雜交技術知識點
植物體細胞雜交使遠緣雜交不親和的植物有可能實現(xiàn)遺傳物質重組，下面是學習啦小編給大家?guī)淼母咧猩镏参矬w細胞雜交技術知識點，希望對你有幫助。
高中生物植物體細胞雜交技術基礎知識點
1、植物體細胞雜交技術：就是將不同種的植物體細胞原生質體在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成完整植物體的技術。
2、過程：
(1)誘導融合的方法：物理法包括離心、振動、電刺激等?；瘜W法一般是用聚乙二醇(PEG)作為誘導劑。
(2)細胞融合完成的標志是新的細胞壁的生成。
(3)植物體細胞雜交的終點是培育成雜種植株，而不是形成雜種細胞就結束。
(4)雜種植株的特征：具備兩種植物的遺傳特征，原因是雜種植株中含有兩種植物的遺傳物質。
3、意義：克服了遠緣雜交不親和的障礙。
高中生物植物體細胞雜交技術重要進展
1960年，Kocking用酶法制備高等植物原生質體首次獲得成功;
1970年，Power首次用硝酸鈉進行為誘導劑進行了較大規(guī)模的原生質體誘導融合;
1971年，Takebe首次從離體煙草原生質體培養(yǎng)中獲得再生完整植株;
1972年，Carlson首次獲得粉藍煙草和郎氏煙草的細胞雜種，這也是第一個植物細胞雜種;
1974年，Kao將聚乙二醇誘導融合法應用于植物細胞融合并建立了相應的融合技術;
1978年，Melchers獲得了第一個屬間細胞雜種(番茄+馬鈴薯);
1981年，Zimmerman發(fā)明了電融合儀，并首次提出了電融合概念;
1987年，Schweiger建立了單對原生質體電融合技術程序。
高中生物植物體細胞雜交技術
1.PEG誘導融合法
PEG誘導融合的特點：其優(yōu)點是融合成本低，勿需特殊設備;融合子產(chǎn)生的異核率較
高;融合過程不受物種限制。其缺點是融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害。
PEG的作用機理： Kao等認為，由于PEG分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成H鍵，從而在在原生質體之間形成分子橋，其華中農(nóng)業(yè)大學創(chuàng)建國家精品課程——細胞工程學 文本教案(第七章) 主講教師：柳俊博士、教授結果是使原生質體發(fā)生粘連進而促使原生質體的融合;另外，PEG能增加類脂膜的流動性，也使原生質體的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。
融合技術要點：
融合液：CaCl2·2H2O 8~10mmol
KH2PO4 0.7mmol
甘露醇或山梨醇 0.5~1.0mol
pH 5.6
誘導液：融合液+PEG 20～45%
稀釋液：A液(g/100ml)pH6.0 B液(g/100ml)pH10.5
葡萄糖 7.21 甘氨酸 0.375
CaCl2·2H2O 0.79 NaOH 0.169
DMSO 10ml
2.電融合法
與PEG融合比較起來，電融合有三大優(yōu)點：一是不存在對細胞的毒害問題;二是融合效率高;三是融合技術操作簡便。
電融合儀的結構特點：一是交變電場部分;一是高頻直流電擊部分。
電融合的基本過程：
細胞膜的接觸：當原生質體置于電導率很低的溶液中時，電場通電后，電流即通過原生質體而不是通過溶液，其結果是原生質體在電場作用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質體緊密接觸排列成串。
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