基因檢測技術論文(2)
基因檢測技術論文篇二
轉基因農產品檢測技術淺析
【摘 要】有效科學的農產品檢測基因手段可合理解決社會大眾對轉基因產品質量、安全問題的疑問。本文著重研究了轉基因農產品外源蛋白以及核酸分析檢測方式。通過多渠道驗證，探究了基礎原理，具體的技術特征以及實踐應用。對推進檢測轉基因農產品技術的科學持續(xù)發(fā)展，優(yōu)化農產品整體質量水平，有重要的實踐意義。
【關鍵詞】農產品;轉基因;檢測技術
0.前言
伴隨農產品生產水平的全面提升，對于轉基因產品的質量安全問題逐步引起了各個國家、不同組織以及學界的廣泛爭議。轉基因技術通過現(xiàn)代分子生物手段，令某類物種包含的基因轉移至他類農作物，進而令其遺傳物質形成改變，并呈現(xiàn)出形狀、質量、營養(yǎng)層面的進一步完善，向著消費者需求目標進行發(fā)展轉變，進而獲取到改良基因農產品。目前一些轉基因生產的農產品逐步流通進入了市場之中，創(chuàng)設了顯著的經(jīng)濟效益與利潤。然而其有可能形成對大眾身心健康以及生態(tài)環(huán)境的危害風險、各類不確定因素逐步引起學界人士的重視，他們紛紛表示擔憂。該類現(xiàn)狀問題進一步推進了轉基因農產品應用檢測手段的快速發(fā)展。各類高通量、精準、高效的轉基因產品應用檢測手段得以研究開發(fā)，歐盟體系、美國以及我國等地逐步出臺了轉基因產品的管理政策與制度法規(guī)，進一步推動轉基因物種、產品標簽體制的落實執(zhí)行，進而保證轉基因農產品整體質量與生產安全，降低隱藏危機影響。當前生物技術行業(yè)領域正逐步研究應用轉基因農產品檢測技術分析驗證外源蛋白質以及核酸，并派生出較多技術手段的分支，該類技術手段呈現(xiàn)出各自不同的優(yōu)勢與缺陷。
1.外源蛋白質應用檢測方式
基于抗體以及抗原免疫學原理，可利用對外源基因蛋白進行檢測，來達到定性定量的目標。創(chuàng)建檢測體系需要令外源體系基因形成的蛋白產物通過制備構成特異單克隆以及多克隆抗體，進而形成蛋白質印跡、試紙條測試以及酶聯(lián)免疫測試手段。
1.1蛋白質印跡檢測
該方式依據(jù)抗原抗體呈現(xiàn)的特異性，對復雜物質中的某類蛋白進行檢測?？赏ㄟ^非標記抗體以及抗原決定簇進行集成，而后通過另一類蛋白或是免疫球蛋白對集成抗體進行分析測試。該方式具有明顯的特異性，可良好的進行定性檢測，為分析各類復雜混合物質之中具備特異蛋白的有效手段，檢測靈敏性可達到一到五納克。特別契合較難溶解或是不溶解蛋白質的測試分析。然而該方式無法實施定量研究，這是由于具體的操作環(huán)節(jié)較為復雜繁瑣，同時需要投入較多經(jīng)費，不契合高通量驗證測試。
1.2 ELISA檢測
ELISA檢測方法即酶聯(lián)免疫吸附測試技術，主要令抗原以及抗體特異性同酶對底物通過有效脆化進行集成，依據(jù)酶反映令底物進行顯色。在抗體以及抗原進行集成階段中，通過比色以及熒光反應明確轉基因的具體成分。該階段中酶以及底物反應具體的色彩同樣品抗原含有的總量呈現(xiàn)正比例關系。
該方式體現(xiàn)了酶反應較明顯的靈敏性，以及抗體抗原具備的特異性。一般來講檢測靈敏性可為百分之零點一，同時操作便利高效，投入經(jīng)費合理。當然該技術手段仍舊包含一定問題，即農產品具備的復雜基質會形成測定過程的干擾影響。同時一些導入蛋白并非位于植物各個組織之內均能表達展現(xiàn)。例如在玉米農作物之中蛋白質通常在葉子中，而非展現(xiàn)在谷粒內。加工生產階段中作物含有的蛋白質會形成降解，因而該類技術手段只契合沒加工的各類原材料分析驗證。倘若導入DNA蛋白質不表達，則無法應用該類檢測技術。
1.3免疫試紙條法
應用試紙條測試蛋白同樣基于抗體抗原特異性，其將消化纖維取代聚苯乙烯作為固相載體。通過連接顯色劑令外源蛋白抗體固定于試紙條中。并令其一段至入包含外源蛋白物質提取液內。試紙另一頭毛細管通過吸水令提取液進行上流。一旦特異抗體以及外源蛋白實現(xiàn)融合，便會形成顯色反映。該檢測方式應用便利，可快速進行操作。通常在五到十分鐘可得到檢測結論。然而一類免疫試紙條僅能測試一類蛋白質，無法對農作物轉基因具體品系進行清晰劃分，同時呈現(xiàn)出的檢測靈敏性不高。
2.核酸應用檢測方式
檢測核酸應用方式主體分成四類，一類為核酸印跡方式，另一類為PCR技術。后者還可分成定性手段、復合手段以及競爭定量手段、熒光手段、基因芯片等方式。
2.1核酸印跡方式
核酸印跡方式不但可分析驗證外源DNA，還可明確外源基因排列狀況、具體的拷貝數(shù)以及植株后代呈現(xiàn)出的外源基因可靠性。該方式可消除操作階段中存在的污染影響與轉化階段質粒殘留導致的假陽性反映。然而該方式可令目標DNA實現(xiàn)原位雜交，并不履行放大以及擴充過程，因而檢測精密性較PCR方式低出較多，同時具體流程較為復雜。
2.2 PCR檢測方式
PCR檢測方式基于不全面一致原理以及結果模式，體現(xiàn)出顯著的靈敏性，同時轉基因范疇中應用頻繁廣泛。相比于蛋白質特異性，該技術手段不會受應用材料影響。同時核酸屬性較蛋白質更加可靠，變性后較易體現(xiàn)復性。定性檢測方式具體原理同DNA天然復制較為相似，需要經(jīng)過變性、退火以及延伸的具體流程。令提取得到的樣品DNA用于模板，并將寡核苷酸鏈用于引物，令其同外源基因序列實現(xiàn)補充配對，基于聚合酶的功能，可位于體外高效的特意擴增基因目標片段，進而令具體微量目標片段可快速的擴充并上升到百萬倍水平。
最終形成的產物在染色后將可清晰的分辨出來，而無需利用雜交分析便可辨別認清基因組內具體的核苷酸序列。該技術方式為一類高效靈敏的檢測驗證核酸手段，通常靈敏性可達到百分之零點零一。當前在轉基因農產品中實現(xiàn)了廣泛的檢測應用。通常，先驗證樣品來源，利用常用植物標準基因驗證實現(xiàn)。而后，驗證轉基因農產品中通常包含的三類通用元件，及啟動和終止子，還有標記基因。倘若得到陽性結果，則需要繼續(xù)驗證外源結構基因。當前我國逐步研究開發(fā)了PCR定性驗證方式，并頒布了行業(yè)領域相關技術標準。
3.結語
總之，伴隨農業(yè)生產之中基因手段技術的豐富應用，更多樣化的改良性質轉基因作物實現(xiàn)了世界范疇中的多元化種植。我國逐步批準對棉花、甜椒、水稻等農作物進行轉基因生產。其商業(yè)化逐步引發(fā)了安全問題。為此，我們只有創(chuàng)建高效可靠的轉基因檢測技術方式，方能做好安全可靠的驗證分析，明確轉基因作物具體質量，進一步推進檢測技術實現(xiàn)豐富、優(yōu)化、全面、可靠的發(fā)展與升華。
【參考文獻】
[1]黃玉萍，吳貴茹，陳坤杰.近紅外光譜在轉基因農產品檢測中的研究進展[J].江西農業(yè)學報，2010，22(7).
[2]趙成萍，袁建琴，唐中偉，許冬梅，劉建東，史宗勇.轉基因棉籽DNA提取純化及快速PCR檢測研究[J].現(xiàn)代農業(yè)科技，2011(3).
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