【關鍵詞】

開展HIV抗體檢測是發(fā)現(xiàn)傳染源并進行有效管理的基礎，而艾滋病初篩實驗室是發(fā)現(xiàn)感染者的第一道關口，保證其檢測工作質(zhì)量是很重要的。為了更準確、更嚴謹?shù)爻鍪緳z測報告，本艾滋病初篩實驗室在參加省級機構(gòu)室間質(zhì)評的同時，還進行室內(nèi)質(zhì)量控制。現(xiàn)將我室在實際工作中對艾滋病初篩實驗室的質(zhì)量管理進行了總結(jié)和探討，報告分析如下。

1 人員要求與培訓

艾滋病初篩實驗室工作人員必須具有2年以上從事血清學檢測工作經(jīng)驗，上崗前必須接受省級以上HIV抗體篩查檢測技術(shù)培訓并獲得合格證書。在工作中要定期或不定期接受復訓。非衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)人員不得從事HIV抗體檢測工作。

2 樣品的采集、處理和保存

HIV抗體篩查檢測最常用的樣品是血液，用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量靜脈血，室溫下自然放置1～2h，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min，吸出血清備用。采集樣品時應避免溶血和微生物污染。渾濁或有沉淀的血清樣品應先離心沉淀后取上清液檢測。

用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應存放于-20℃以下，短期（1周）內(nèi)進行檢測的樣品存放于2～8℃。盡量避免血清樣品反復凍融產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

3 試劑準備

篩查試劑必須經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、批檢合格在有效期內(nèi)的試劑，使用經(jīng)臨床質(zhì)量評估敏感性和特異高的試劑。必須是HIV-1/2混合型。

4 樣品檢測［1，2］

4.1 將試劑和樣品放置在室溫(18～23℃), 按HIV抗體篩查檢測的SOP做好試劑準備。

4.2 備好試劑盒、待檢樣品和外部對照質(zhì)控血清后，按試劑盒說明書以及質(zhì)控和安全防護要求進行篩查檢測。注意防止樣品間交叉污染。

4.3 復檢試驗 對初篩呈陽性反應的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復檢測。如兩種試劑復測均呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認。

4.4 初篩試驗結(jié)果的報告 對呈陰性反應的樣品，可由實驗室出具HIV抗體陰性報告；對呈陽性反應的樣品，須進行復檢，不能出陽性報告。

5 設備維護與校準

設立常用儀器的維護及校準制度，以保證正常運轉(zhuǎn)。

5.1 酶標讀數(shù)儀、洗板機 每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每周：清潔儀器表面，保護光學零件不沾灰塵。每月：檢查洗滌時各孔是否與相應的沖洗頭對位良好，負壓是否符合規(guī)定要求。每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準程序或使用校準板，對濾光片的精密度進行校準并保留記錄。實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應隨時進行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。

5.2 移液器 1年至少應該標定1次，發(fā)現(xiàn)異常情況應隨時進行校準。標定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準法、同位素計數(shù)法以及使用配套校準盒等。校準多道移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)、準確地加樣。移液器的精密度應在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。

5.3 冰箱和孵育箱 必須每天檢查和記錄低溫、超低溫冰箱及孵育箱的溫度，并做好記錄。

5.4 定期檢查其他儀器設備 精密儀器及出具實驗結(jié)果的儀器必須定期校準，其他儀器定期檢查并做好記錄。每次操作時必須加入相應的外部對照質(zhì)控血清，并把該結(jié)果及時報告給實驗室主任或?qū)嶒炇屹|(zhì)量控制人員。

6 實驗室內(nèi)質(zhì)量控制

6.1 一般使用內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清來進行質(zhì)量控制。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設置的一個弱陽性對照血清，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。

6.2 每一次檢測必須使用外部對照質(zhì)控血清，繪制質(zhì)量控制圖。每天檢測結(jié)束后，檢測者應把當天外部對照血清測定結(jié)果畫在圖上，確定在允許范圍內(nèi)，方可發(fā)出標本檢測報告，這樣做可使檢測者及時分析質(zhì)量控制圖中出現(xiàn)的各種問題，采取相應措施。

6.3 在ELISA法檢測HIV試驗中，當外部對照血清的測定結(jié)果波動在x+2s范圍內(nèi)，表明工作正常，結(jié)果可靠；若超過x+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，及時分析原始數(shù)據(jù)，對具體檢驗過程進行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復測試；若超過x+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。

6.4 引起室內(nèi)質(zhì)控失控的原因很多。如：換用新批號診斷試劑盒或標準血清、儀器設備未經(jīng)檢定、校準或測試、溫育時間和溫度不準確、新的檢驗人員、質(zhì)控標準血清反復凍融等，此時要及時查找原因予以糾正。

6.5 月底計算當月測定結(jié)果的x、s和CV，并與其他月份同一批號質(zhì)控標準血清所得x、s和CV相比較，通過圖形資料對比進行誤差分析，從而發(fā)現(xiàn)常規(guī)檢測的精密性和準確性是否發(fā)生了變化。

6.6 所用的外部對照質(zhì)控血清為低溫冷凍保存的液體，使用時要融化徹底并充分混勻，達到室溫方可使用。室內(nèi)質(zhì)量控制是通過對外部對照質(zhì)控血清的檢測和分析，推斷和控制常規(guī)標本的檢測質(zhì)量，因此，外部對照質(zhì)控血清與檢測標本必須同等對待。

6.7 通常把臨界值上下10％的范圍定為檢測結(jié)果灰區(qū)。對于檢測過程中出現(xiàn)的灰區(qū)標本均應進行重復試測，以減少假陽性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，并對實驗結(jié)果和過程進行記錄并存檔保存。

【參考文獻】
1 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范.中國疾病預防控制中心，2004，12.
2 梅玲.ELISA檢測HIV的實驗室內(nèi)質(zhì)量控制.中華醫(yī)學實踐雜志,2006,5(6):663-664.